鸡马立克氏病病毒的实验室诊断

文章主题:养鸡技术  文章来源:manbetx客户端2.0下载  发布时间:2017-08-27

从病鸡和许多外表正常的鸡体中都不难分离出病毒株。供分离病毒用的首选样品是肿瘤细胞、肾细胞以及脾或周围血液的白细胞。由于mdv在这些组织中是高度细胞结合性的,所以必须用全细胞作为接种物。羽毛囊是从病鸡中分离完整病毒粒子的唯一良好来源。被怀疑含有mdv的样品,可以用接种易感鸡、细胞培养物和鸡胚的方法来分离病毒。

雏鸡接种法:这是分离mdv最敏感的方法。选择易感鸡,在1日龄或l周龄内用腹腔接种的途径进行感染,然后严格隔离饲养观察。接种后经18 -21天,对试验鸡连同相应的阳性和阴性对照,进行有无感染迹象的检查。试验应至少持续10周。

细胞培养法:这种方法的敏感性虽不如雏鸡接种法,但简单易行,仍很有实用价值。首先要制备鸭胚成纤维细胞或鸡肾细胞的培养物,最适宜的接种物是白细胞、肿瘤细胞或血液。5 - 14天出现典型的mdv蚀斑,而对照培养物中不见这种变化,这就是分离到mdv的证据。这种特征性的蚀斑,由圆形和梭形的折光性细胞和含有cowdrva型核内包涵体的多核细胞所组成。

鸡胚接种法:通过卵黄囊或绒毛尿囊膜途径接种病毒的鸡胚,分别于接种后4-6天或10-11天在绒毛尿囊膜上产生痘样病斑。

在实验室诊断中,md的血清学试验通常用琼脂凝胶免疫扩散试验,检测mdv抗原及其沉淀抗体。用荧光抗体法或酶抗体法检查病鸡组织中的病毒抗原、肿瘤细胞上的肿瘤相关性表面抗原(matsa),也可检测血清抗体。用已知md阳性血清作琼扩试验检查羽毛囊抗原,操作十分简便。从被检鸡身上拔下几根含羽髓的羽毛,剪下含羽髓的部分放入小青瓶内,用玻璃棒进行适当挤压浸提后,即可用于试验。此法敏感性高,人工感染mdv的鸡,在接种20天后,羽髓抗原阳性率可达90%以上。用已知mdv抗原作琼扩试验检测血清抗体的方法,可用于来免疫发病的诊断,也可用于流行病学调查。

病毒中和试验( vn)或蚀斑减少试验可用于检测感染鸡血清的中和抗体。

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